توضیحات
| ۴ preps sample | ۵۰ preps sample | ۱۰۰ preps sample | |
| PT Buffer | ۲ml | ۲۰ ml | ۴۰ ml |
| PB Buffer | ۲.۵ml | ۲۵ ml | ۵۰ ml |
| PW۱ Buffer | ۱.۷ml | ۶ ml | ۶ ml x ۲ |
| PW۲ Buffer | ۲ml | ۸ ml | ۸ ml x ۲ |
| PE Buffer | ۱.۵ml | ۱۰ ml | ۲۰ ml |
| Proteinase K | ۲۰ mg | ۲۰ mg | ۲۰ mg x ۲ |
| Spin Column | Spin Column | ۵۰ pcs | ۵۰ pcs x ۲ |
| Collection Tube | Collection Tube | ۵۰ pcs | ۵۰ pcs x ۲ |
* آماده سازی بافر PW۱ و PW۲ و محلول پروتئیناز K قبل از اولین استفاده:
| ۴ preps sample | ۵۰ preps sample | ۱۰۰ preps sample | |
| PW۱ Buffer | ۲ml x ۲ | ۴۰ ml | ۴۰ ml x ۲ |
| PW۲ Buffer | ۲.۵ml | ۵۵ ml | ۵۵ ml x ۲ |
| proteinase K | ۱۰۰ μl | ۱ ml | ۱ ml x ۲ |
قبل از اولین استفاده:
در کیت های ۴ عددی
- مقدار ml۷/۱ اتانول (۹۶-۱۰۰) درصد به محلولPW۱ Buffer و ml۲ به محلول PW۲ Buffer اضافه کنید و سپس لیبل روی ظرف ها را علامت گذاری کنید.
- قبل از اولین استفاده μl۱۰۰ از محلول پروتئیناز K یا μl۱۰۰از ddH۲O را به ویال حاوی پروتئیناز K اضافه کنید و سپس به آرامی ویال را ورتکس کرده تا محلول به خوبی حل گردد.
در کیت های۵۰ عددی
- مقدار ml۳۴ اتانول (۹۶-۱۰۰) درصد به محلولPW۱ Buffer و ml۴۷ به محلول PW۲ Buffer اضافه کنید و سپس لیبل روی ظرف ها را علامت گذاری کنید.
- قبل از اولین استفاده ml۱ از محلول پروتئیناز K یا ml۱ از ddH۲O را به ویال حاوی پروتئیناز K اضافه کنید و سپس به آرامی ویال را ورتکس کرده تا محلول به خوبی حل گردد.
نکات مهم:
- ویال پروتئیناز K را در دمای -۲۰°C نگهداری کنید. قبل از اولین استفاده حجم مورد نیاز محلول پروتئیناز K را به ویال پروتئیناز K اضافه کنید. سپس ورتکس کرده و مطمئن شوید که پروتئیناز K کاملاً حل شده است.
- حجم مورد نیاز اتانول (۹۶-۱۰۰) درصد را در اولین استفاده به بافر PW۱ و بافر PW۲ اضافه کنید.
- قبل از شروع استخراج انکوباسیون یا حمام آب را تا دمای °C ۶۰ گرم کنید.
- قبل از شروع استخراج اتانول مطلق در دمای °C ۲۰- ذخیره کنید.
روش استخراج:
- mg۱۰-۱۵ بافت را در یک میکروتیوب ml۲ وزن کرده و μl ۴۰۰ از محلول PT buffer به آن اضافه کنید. میکروتیوب را چند بار سروته کرده و بمدت چند ثانیه ورتکس کنید.
- μl ۲۰ میکرولیتر پروتئیناز K به محلول اضافه کرده و بمدت ۱۵ ثانیه بخوبی ورتكس کنید. سپس مخلوط حاصله را به مدت ۳۰-۲۰ دقیقه در دمای °C ۶۰ انکوبه کنید. (در طی انکوباسیون، میکروتیوب هر چند دقیقه یکبار به آرامی تكان داده می شود تا لیز سلولی به خوبی صورت گیرد).
- پس از مدت زمان انکوباسیون روی محلول حاصله، μl ۵۰۰ از محلول PB Buffer بریزید و به آرامی میکروتیوب را سر و ته کنید.( توجه کنید اگر پس از اضافه کردن PB Buffer داخل میکروتیوب رسوب بافت باقی ماند ، میکروتیوب را بمدت ۲-۱ دقیقه در دمای °C ۶۰ انکوبه کنید تا بقیه رسوبات حل شوند).
- محلول حاصله را به ستون جداسازی که در داخل تیوب جمع کننده قرار دارد منتقل کنید و پس از آن در سانتریفیوژ با سرعت rpm ۱۲۰۰۰ بمدت ۱ دقیقه قرار دهید.
- مایع جمع شده در تیوب جمع کننده را دور ریخته و ستون را مجددا در تیوب جمع کننده قرار دهید و از محلول PW۱ buffer به میزان μl ۷۰۰ به ستون اضافه کنید و آن را بمدت ۲ دقیقه با سرعت rpm ۱۰۰۰۰ سانتریفیوژ کنید.
- پس از سانتریفیوژ مایع جمع شده در تیوب جمع کننده را دور ریخته و μl ۵۰۰ از محلول PW۲ buffe را به ستون اضافه کنید و آن را بمدت ۲ دقیقه با سرعت rpm ۱۰۰۰۰ سانتریفیوژ کنید.
- ستون را مجددا در تیوب جمع کننده قرار دهید و بدون اضافه نمودن هیچ گونه محلولی آن را با سرعت rpm۱۴۰۰۰ بمدت ۳ دقیقه سانتریفیوژکنید.
- ستون را به داخل یک میکروتیوب ۵/۱ میلی لیتری انتقال دهید و به مقدار μl ۳۰ الی μl ۱۰۰ از PE buffer اضافه کنید و بمدت ۱۰-۵ دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید.
- تیوب را بمدت ۳ دقیقه با سرعت rpm ۱۳۰۰۰ سانتریفیوژ کنید، سپس ستون را دور انداخته و مایع جمع شده در میکروتیوب را که حاوی DNA است در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری کنید.
توجه: برای حذف مقادیر احتمالی RNA ، μl ۴ آنزیم RNase A با غلظت mg/ml۱۰ ( از اجزای کیت نمی باشد) را در مرحله ۲ قبل از اضافه کردن پروتئیناز K اضافه کنید و جند ثانیه ورتکس کرده، سپس مرحله ۲ را ادامه دهید.
شما هم میتوانید در مورد این کالا نظر بدهید.
برای ثبت نظر، از طریق دکمه افزودن دیدگاه جدید نمایید. اگر این محصول را قبلا خریده باشید، نظر شما به عنوان خریدار ثبت خواهد شد.
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.